やさしさと健康の新世紀を開く 医歯薬出版株式会社

『Medical Technology』　34巻11号

（2006年11月15日発行）
図の差し替え，本文の訂正

この度は，上記雑誌をご購入下さいまして誠にありがとうございました．
以下の箇所に関して誤りがございましたので，ここに訂正するとともに深くお詫び申し上げます．

2006年12月26日更新
図の差し替え
p.1164

本文の訂正
p.1165 (3) TRC (Transcription Reverse Transcription Concerted Reaction)法
　用語解説の2）から6）を参照しながら ,反応の進行状況図4を見て頂きたい.標的RNAの特定領域にscissor プローブがハイブリダイズする（図4-①）.またreverse primerが標的RNAにアニーリングしてRTにより相補的なcDNAが伸長される（図4-①）.この時,RNAとDNAが二本鎖を形成した時のみに特異的にRNAを加水分解する RTのRNaseH活性により ,scissor プローブとハイブリダイズしたRNA部分（図4-②）と ,合成されたcDNAと二本鎖を形成した鋳型RNA（図4-③）は分解される（図4-③ ,④）. 5’末端にT7 RNAポリメラーゼのプロモーター配列を有したforward primerがRTによって合成されたcDNAの特異的な配列にアニーリングし、cDNAを鋳型として、 RT (機能3)により DNAが合成される（図4-⑤）.その後,5’末端２本鎖T7プロモーター配列をT7 RNAポリメラーゼが認識し, cDNAを鋳型として , RNAが合成される（図4-⑥）. 合成された RNAにさらに reverse primerがハイプリダイズし,このサイクルが繰り返される事により,標的 RNAと同じ配列を有した RNAが大量に合成される.蛍光増感していないINAF probeが増幅された標的RNAと二本鎖を形成し,蛍光色素が二本鎖に入り込むことにより蛍光増感する（図4-⑦）（東ソーTRC解説URL：http://www.tosoh.co.jp/science/trc/trc.htmlより）.
　TRC法は逆転写酵素（Reverse Transcriptase, RTすなわち RNA依存性DNAポリメラーゼでRNaseH活性と DNA依存性DNAポリメラーゼ活性を有する）とT7 RNAポリメレース（DNA依存性RNAポリメラーゼ）との協奏反応によるRNA増幅検出法である.これにINAF (Intercalation Activating Fluorescence Probe)を使用し,このプローブが標的RNAと二本鎖を形成し ,蛍光色素が二本鎖に入り込むことにより蛍光増感する.現時点では一定温度で反応を行うため反応後30分で結果を判定することができる.ただし,リアルタイムPCRと同様に高価な機器が必要となる.
　研究用試薬が、東ソーからノロウイルスRNA検出試薬TRCRtest Noro1およびNoro2として販売されている.この反応系はシングルチューブ反応で,機器を用いた検出を行うため反応後に蓋を開ける必要がない.そのためコンタミネーションの問題はほぼないといえる.プロダクトが疫学調査に利用できないのは,リアルタイムRT-PCRの系と同様である.
p.1166

◆用語解説◆

2）転写酵素 (reverse transcriptase, RT)
　標的RNAにアニーリングするreverse primerを起点に鋳型RNAに相補的なcDNAを合成する酵素.TRC法で使用されるRTは a) RNA dependent DNA ポリメラーゼ活性 , b)RNaseH活性, c) DNA dependent DNA ポリメラーゼ活性を有する .